龙胆探针法PCR鉴定试剂盒 新品

龙胆探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针与靶序列结合时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现模板的定量或定性检测。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液（含逆转录酶） | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 龙胆特异性引物混合液 | 100μL |

| 龙胆探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每步换枪头避免交叉污染。

2. 样品RNA/DNA提取

建议设置阴性对照（NC，水）和阳性对照（PC，阳性稀释液）。

兼容常规RNA提取试剂盒（如柱式法）。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30 min（若检测RNA）；

预变性：94℃ 10 min；

扩增：40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct ≤ 35（或36，依品牌）；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑值（35~40）需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。

防污染：使用带滤芯枪头，定期用75%乙醇或紫外消毒台面。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

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