莲子心探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 莲子心探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Plumula Nelumbinis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5055 |
产品概述
本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，专为莲子心（Plumula nelumbinis）的快速、高特异性鉴定设计。适用于中药材真伪鉴别、植物源性成分检测等科研领域，不可用于临床诊断。
产品特点
高特异性：针对莲子心保守基因区域设计引物及荧光探针，无交叉反应。
高灵敏度：最低检测限达100拷贝/μL，可检测微量DNA模板。
操作便捷：预混反应液含Taq酶、dNTPs及探针，仅需添加模板即可启动反应。
防污染设计：闭管检测降低气溶胶污染风险，内置阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）确保质控。
试剂盒组分
| 成分 | 规格（50次反应） |
| 2×预混MasterMix | 500 μL |
| 莲子心特异性引物混合液 | 100 μL |
| TaqMan探针 | 50 μL |
| 阳性对照DNA | 50 μL |
| 模板稀释液 | 1 mL |
实验流程
样本制备
样本类型：莲子心粉末、植物组织或提取液。
DNA提取：推荐使用柱式植物DNA提取试剂盒，A260/A280纯度应达1.8–2.0。
反应体系（25 μL）
| 组分 | 体积 |
| 预混MasterMix | 12.5 μL |
| 引物混合液 | 2 μL |
| 探针 | 1 μL |
| DNA模板 | 5 μL |
| 超纯水 | 补至25 μL |
扩增程序（ABI 7500为例）
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 1 min | |
| 荧光采集 | 60℃ | 10 sec | |
结果判读
阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
可疑：35<Ct<40需复测，复测后Ct<40判为阳性。
注意事项
分区操作：严格区分试剂准备区、样本处理区及扩增区，使用带滤芯枪头。
质控要求：阴性对照无扩增，阳性对照Ct值≤30，否则实验无效。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融。
局限性
仅限科研使用，不可替代临床检测。
无法区分活体与降解DNA。
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