半枝莲探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于半枝莲（Herba scutellariae barbatae）的快速、高特异性鉴定。通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割荧光标记探针，实现扩增产物的实时定量检测，适用于科研领域的定性及定量分析。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物和探针针对半枝莲保守序列设计，避免与其他微生物交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及探针，仅需提供DNA模板即可操作。

双重检测功能：支持定性和定量分析，定量线性范围达5个数量级（10^1–10^7拷贝/μL）。

内控设计：含阳性对照（10^8拷贝/μL），可区分假阴性结果。

高效稳定：-20℃保存12个月，低温运输确保试剂活性。

规格与成分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50–100 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | 半枝莲引物-探针混合液 | 100 μL |

| 试剂五 | 半枝莲qPCR探针 | 50 μL |

| 试剂六 | 阳性对照（10^8拷贝/μL） | 50 μL |

| 附 | 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7–10^2拷贝/μL），独立区域操作以避免污染。

2. 样本DNA提取

建议设置阴性对照（水）和阳性对照（稀释阳性模板），使用兼容的DNA提取试剂盒。

3. qPCR反应体系（20 μL/次）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 引物-探针混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 模板DNA/标准品 | 5 μL | — | 5 μL |

| 超纯水 | — | 5 μL | — |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct ≥ 40；阳性：Ct ≤ 35；35 < Ct < 40需复测。

阳性对照Ct ≤ 30，阴性对照无扩增。

注意事项

防污染：分区分装操作，使用带滤芯枪头及专用工作服。

试剂保存：-20℃避光保存，使用前充分混匀并离心。

局限性：

样本质量、基因突变或提取效率可能影响结果。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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