天花粉探针法PCR鉴定试剂盒

产品基本信息

检测目标：特异性鉴定双边栝楼（Trichosanthes rosthornii）种源性基因。

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

运输要求：低温避光运输，建议使用冰袋或干冰。

试剂盒组成

核心组分：

预混PCR反应液（含探针、引物、dNTPs、缓冲液等）

DNA聚合酶（热稳定性酶，如Taq或Pfu）

阳性对照（非传染性DNA片段）

阴性对照（无核酸酶水）

辅助试剂：

变性缓冲液（用于PCR产物变性）

荧光RT-PCR专用模板稀释液（标准曲线制备）

实验步骤

1. 样本制备

DNA提取：使用柱式病毒RNAout或兼容的提取试剂盒，建议设置阳性对照（PC）和阴性对照（NC）。

标准曲线制备：将阳性对照按10倍梯度稀释（10¹–10⁶拷贝/μL），用于定量分析。

2. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混反应液 | 15 |

| DNA模板 | 2–5 |

| 无核酸酶水 | 补足至20 |

3. 扩增程序

初始变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40 cycles）：

变性：95℃ 30秒

退火：50–65℃（依引物优化）30秒

延伸：72℃ 1分钟/kb

终延伸：72℃ 10分钟

4. 产物检测

定性分析：Ct值≤36判为阳性，≥40为阴性；36–40需复测。

定量分析：根据标准曲线计算模板浓度（log值）。

注意事项

防污染措施：

分设样本处理、试剂配制、扩增区，使用带滤芯枪头。

实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

质量控制：

阴性对照Ct值需≥40，阳性对照需有典型扩增曲线（Ct≤36）。

适用范围：仅限科研，不适用于临床诊断。

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