荔枝核探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 荔枝核探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Litchi Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5058 |
技术原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法，通过以下步骤实现高特异性检测：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针与靶序列结合时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
信号检测：扩增过程中荧光强度与产物量成正比，通过标准曲线定量分析起始模板浓度。
产品特点
高灵敏性：可检测低至几百拷贝/反应的模板。
高特异性：引物及探针针对荔枝核保守序列设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，用户仅需提供RNA模板。
内控设置：含阳性对照（无传染性DNA片段）和阴性对照，确保结果可靠性。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 荔枝核引物混合液 | 100μL |
| 荔枝核探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
操作流程
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）
使用阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样本RNA提取
推荐使用柱式RNA提取试剂盒，提取后立即检测或-80℃保存。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 探针 | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| RNA模板 | 5μL |
4. 扩增程序
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型；
阴性：Ct≥40；
可疑（35<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
分区操作：试剂准备区、样本处理区、扩增区需物理隔离，使用带滤芯吸头。
防污染：阳性对照最后加入，避免裸手接触反应管。
仪器设置：ABI系列仪器需关闭ROX校正，淬灭基团选择“None”。
废弃物处理：实验后需无害化处理。
声明
本产品仅限科研使用，严禁用于临床诊断或其他非科研用途。
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