昆布探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 昆布探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Thallus Laminariae Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5061 |
检测原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法：
探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过检测荧光强度实现靶序列定量分析。
三步流程：
反转录（若检测RNA）：将RNA模板转化为cDNA。
扩增：通过PCR循环扩增目标序列。
检测：实时监测荧光信号，生成扩增曲线。
产品特点
即开即用：用户仅需提供样品RNA/DNA模板。
高灵敏度与特异性：引物及探针针对昆布高度保守区设计，避免交叉反应。
双重用途：支持定性和定量检测（线性范围≥5个数量级）。
内置对照：提供阳性对照（无传染性DNA片段）和阴性对照，排除假阴性。
兼容性：适配多数RNA提取试剂盒。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 昆布qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 昆布qRT-PCR探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）
标记离心管（6管），依次稀释阳性对照至10¹~10⁶拷贝/μL，避免交叉污染。
2. 样品制备
提取RNA（建议设置N+2样本，含阳性/阴性对照）。
3. qRT-PCR反应（20μL体系）
按比例加入缓冲液、酶混合液、探针、引物及模板，上机运行以下程序：
逆转录：50℃ 30分钟（若需）。
预变性：94℃ 10分钟。
扩增：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（40循环，FAM通道采集信号）。
数据分析
定量检测：以阳性对照log浓度为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤36，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct≥40或无信号。
灰区（36<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
防污染：使用带滤芯枪头，定期清洁台面及移液器。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
用途限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
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