苦参探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 苦参探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Sophorae Flavescentis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5064 |
产品原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测苦参特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实现靶序列的定量与定性分析。
产品特点
高灵敏度：引物与探针针对苦参保守序列设计，检测限低至10²拷贝/μL。
特异性强：不与相近物种核酸发生交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，仅需提供RNA模板。
内控对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），便于排除假阴性。
适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能说明 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |
| 引物混合液 | 100μL | 苦参特异性引物 |
| 探针 | 50μL | 荧光标记探针 |
| 阳性对照 | 50μL | 1×10⁸拷贝/μL DNA片段 |
| 说明书 | 1份 | 操作流程及数据分析方法 |
实验步骤
1. 标准曲线制备
梯度稀释阳性对照（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。
每稀释步骤使用带滤芯枪头，冰上暂存。
2. RNA提取
建议使用柱式RNA提取试剂盒，并行设置阴/阳性提取对照。
3. qRT-PCR反应
体系配置（20μL/反应）：
缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物2μL + 模板RNA 5μL。
反应程序：
逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性判定：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型。
可疑：35<Ct<40，需复测确认。
阴性：Ct≥40或无扩增。
注意事项
实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。
探针避光保存，反复冻融≤3次。
阳性对照需最后加入，防止交叉污染。
废弃物需按生物危害品处理。
声明：本产品仅供科研使用，临床检测需经相关法规批准。
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