技术原理

基于实时荧光定量PCR(qPCR)探针法:
探针设计:5'端标记荧光报告基团,3'端标记淬灭基团。Taq酶在扩增时切割探针,释放荧光信号,实现靶序列特异性检测。
高特异性:引物及探针针对Semen persicae保守序列设计,经生物信息学验证,交叉反应风险极低。
灵敏度:最低检测限达10³拷贝/μL,无需增菌步骤。
产品名称 | 桃仁探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Persicae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4966 |

试剂盒组成

核心组分:
qPCR缓冲液
逆转录酶混合液
桃仁特异性引物及探针混合液
阳性对照(1×10⁸拷贝/μL,无传染性DNA片段)
模板稀释液
自备材料:RNA提取试剂、无核酶耗材、荧光定量PCR仪(需支持FAM通道)。
操作流程

1. 实验分区要求
三区分离:试剂准备区、样本处理区(需生物安全柜)、扩增区。各区仪器、耗材独立,紫外线消毒。
防污染措施:使用带滤芯吸头,避免裸手接触反应管。
2. 标准曲线制备(定量分析)
将阳性对照按10倍梯度稀释(10²~10⁷拷贝/μL),分装至标记离心管。
3. RNA提取
采用兼容的RNA提取试剂盒,建议设置阴/阳性提取对照。
4. qPCR反应体系(20μL)
| 成分 | 体积(μL) |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板RNA/标准品/对照 | 5 |
5. 扩增参数
逆转录:50℃ 30 min
预变性:94℃ 10 min
扩增循环(40次):94℃ 15 sec → 60℃ 1 min(采集FAM信号)
数据分析
定量检测:以Ct值为纵轴,标准品log浓度为横轴绘制曲线,计算样本浓度。
定性判定:
阳性:Ct ≤ 35,扩增曲线呈典型S型。
可疑(35 < Ct < 40):需复测确认。
阴性:Ct ≥ 40或无扩增。
注意事项

防污染:实验全程使用无核酶耗材,避免RNA降解。
批次一致性:不同批号试剂不可混用。
仪器设置:ABI系列仪器需关闭ROX校正,淬灭基因选None。
废弃物处理:实验废弃物需经无害化处理后再丢弃。
性能参数

特异性:100%(经40+近缘种验证,无非特异扩增)。
重现性:100%(批内/批间差异可控)。
检测范围:覆盖桃仁特异性基因序列,3-4小时完成检测。
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关键字: 桃仁;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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