核桃仁探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 核桃仁探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Juglandis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5098 |
技术原理
本试剂盒基于**实时荧光定量PCR（探针法）**技术，通过以下步骤实现核桃仁核酸的定性与定量检测：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
实时检测：扩增过程中荧光信号强度与产物量成正比，通过Ct值（阈值循环数）定量起始模板浓度。
产品组成
| 成分 | 规格/包装量 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 核桃仁引物混合液 | 100μL |
| 核桃仁qRT-PCR探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
实验流程
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。
标记离心管（7~2号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀后冰上保存。
2. 样品RNA提取
建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照），使用兼容的RNA提取试剂盒纯化模板。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管/标准曲线管 | 阴性对照管 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL |
| 探针 | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL |
| RNA模板/标准品/水 | 5μL | 5μL（水） |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈典型S型。
阴性：Ct ≥ 40。
可疑（35<Ct<40）：需重复检测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
探针避光：反应液需避光保存，避免荧光淬灭。
废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及器材。
声明
本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断或其他非科研用途。
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