预期用途
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，用于检测锁阳特异性核酸序列，辅助锁阳感染的科学研究。试剂盒提供人工合成的DNA阳性对照，避免活体样本污染风险。
产品名称 | 锁阳探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Cynomorii Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4969 |
检验原理
采用TaqMan探针法，针对锁阳基因保守区设计引物和探针。在PCR扩增过程中，探针与靶序列结合后释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定性或定量分析。
灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶序列。
特异性：引物经优化，避免与其他微生物DNA交叉反应。
线性范围：定量检测时覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
试剂组成
| 成分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 0.5 mL或500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 探针法PCR引物-混合液 | 150μL或50T干粉 |
| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50μL |
| 阴性质控品 | 50μL（部分厂商提供）|
| 超纯水 | 1 mL |
注意：不同批号组分不可混用。
储存与运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。
有效期：12个月。
运输：低温（-20℃）运输，建议使用冰袋。
自备材料
样品DNA提取试剂（推荐商品化试剂盒）。
无核酸酶离心管、滤芯吸头（10/200/1000μL）。
荧光定量PCR仪（兼容ABI、Bio-Rad、LightCycler等机型）。
操作步骤
1. 标准曲线制备（独立区域操作）
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^6–10^1拷贝/μL），每步更换枪头，冰上保存。
2. 样本处理
提取待测样本DNA，同时设置阴/阳性对照（N+2原则）。
推荐提取方法：Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒（或其他兼容试剂盒）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| 2×MasterMix | 10 |
| 引物-探针混合液 | 3 |
| 模板DNA | 7 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集 |
| 预变性 | 95℃ | 2–3 min | 否 |
| 40–45循环 | 95℃ | 15 sec | 否 |
| | 55–60℃ | 30–60 sec | FAM通道 |
结果判定
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤39，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct≥40或无扩增。
灰区（39<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
分区操作：试剂配制、样本处理、扩增需在独立区域进行，避免污染。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
生物安全：实验废弃物需按生物危害物处理（10%次氯酸或75%乙醇消毒）。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
交叉污染可能导致假阳性；
提取效率差异影响定量准确性。
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