检测原理
基于实时荧光定量PCR(qPCR)探针法技术:
探针设计:5'端标记荧光报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团。Taq酶在扩增时切割探针,释放荧光信号,信号强度与靶序列含量成正比。
定量分析:通过标准曲线(10<sup>1</sup>–10<sup>7</sup>拷贝/μL)计算待测样本中柿蒂特异性RNA/DNA的浓度。
产品名称
柿蒂探针法PCR鉴定试剂盒
英文名称
Calyx Kaki Probe-based PCR Identification Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR4977
产品特点
高灵敏度:优化引物与探针,检测限低至10拷贝/μL。
特异性强:靶向柿蒂保守序列,避免交叉反应。
即开即用:预混缓冲液、酶、引物及探针,仅需提供模板RNA/DNA。
质量控制:含阳性对照(无传染性DNA片段)和阴性对照,区分假阴性。
应用范围:科研用途(不可用于临床诊断)。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 酶混合液 | 100μL |
| 模板稀释液 | 1mL |
| 引物混合液 | 100μL |
| 荧光探针 | 50μL |
| 阳性对照(1×10<sup>8</sup>拷贝/μL) | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
梯度稀释阳性对照(10倍稀释,6个浓度点),独立操作避免污染。
2. 样本制备
提取待测RNA/DNA,建议设置阳性(PC)和阴性对照(NC)。
3. qPCR反应体系(20μL)
| 组分 | 体积(μL) |
| 缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板RNA/DNA | 5 |
4. 反应程序
逆转录:50℃ 30 min(若含RNA);
预变性:94℃ 10 min;
扩增(40循环):94℃ 15 sec → 60℃ 1 min(采集荧光)。
结果判读
定量分析:根据标准曲线计算样本浓度。
定性分析:
阳性:Ct值≤36,典型S型扩增曲线;
阴性:Ct值≥40或无信号;
可疑(36<Ct<40):需复测确认。
注意事项
操作分区(样本制备、扩增、产物分析),避免交叉污染。
使用带滤芯枪头,试剂解冻后需混匀并短暂离心。
废弃产物需按生物危害物处理。
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