生姜探针法PCR鉴定试剂盒

预期用途

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于生姜（Zingiber officinale）核酸的定性与定量检测，适用于科研领域，不适用于临床诊断。

检验原理

采用优化的引物和探针，靶向生姜DNA高度保守区域，确保高特异性（无交叉反应）。

通过荧光信号实时监测扩增产物，结合标准曲线实现定量分析（线性范围：10³~10⁸ copies/mL），或通过Ct值判定阴阳性。

含阳性对照（无传染性DNA片段），可区分假阴性结果。

试剂组成

| 成分 | 规格 |

| 2×Probe qPCR MasterMix | 0.5 mL ×1管 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL ×1管 |

| 超纯水 | 1 mL ×1管 |

| 探针法PCR引物-混合液 | 150 μL ×1管 |

| 阳性对照（1×10⁷ copies/μL） | 50 μL ×1管 |

注：不同批号组分不可混用。

运输与保存

低温运输，-20℃保存，有效期12个月。

自备材料

样品DNA模板、离心管、带芯枪头、冰盒等。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI系列、Bio-Rad、LightCycler等）。

实验步骤

1. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管（6~1号），每管加45 μL稀释液。

6号管加入5 μL阳性对照（10⁷ copies/μL），震荡混匀得10⁶ copies/μL标准品，依次梯度稀释至10¹ copies/μL。

2. 样本处理

设置N+2个提取（含阳性/阴性对照），使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样本。

3. PCR反应体系（20 μL/管）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| 2×MasterMix | 10 | 10 | 10 |

| 引物-探针混合液 | 3 | 3 | 3 |

| 样本DNA/标准品/水 | 7 | 7（水） | 7（对应标准品） |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 预变性 | 95℃ | 2 min |

| 45循环 | 95℃ | 15 sec |

| （采集信号） | 58℃ | 30 sec |

结果分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且呈典型扩增曲线。

样本Ct≤39为阳性；≥40为阴性；39~40需复测。

注意事项

分区操作：试剂配制、样本处理、扩增需严格分区，避免污染。

质量控制：

试剂使用前充分混匀离心。

阳性对照最后加入，防止污染。

生物安全：

实验废弃物按生物危害物处理。

操作台用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

局限性：

结果受样本质量、提取效率及操作规范影响。

基因变异可能导致假阴性。

声明：本产品仅限科研使用，严禁用于临床诊断或其他非科研用途。

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