产品基本信息
规格：50次/盒（20μL反应体系）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月
适用范围：科研用途（非临床），用于山楂（Fructus crataegi）的DNA定性或定量检测。
产品名称 | 山楂探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus Crataegi Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4985 |
技术原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ）。当探针完整时，荧光信号被淬灭；PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
实时检测：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现靶序列的定量分析，线性范围达5个数量级（10^2–10^7拷贝/μL）。
试剂盒组成
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | qPCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | qPCR酶混合液（含逆转录酶） | 50–100μL |
| 试剂三 | 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 试剂四 | 山楂特异性引物-探针混合液 | 100μL |
| 试剂五 | 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |
| 试剂六 | 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7–10^2拷贝/μL），每个梯度需更换枪头，避免交叉污染。
2. 样本处理
DNA提取：推荐使用柱式提取法，设置阴性对照（NC，超纯水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物-探针混合液 | 2μL |
| 模板DNA/标准品/对照 | 5μL |
| 超纯水 | 补至20μL |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 10–30 min|
| 预变性 | 94–95℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 35（或39），扩增曲线呈S型。
阴性：Ct ≥ 40，或无扩增。
灰区（35–40）：需复测确认。
注意事项
防污染：分设试剂配制区、样本处理区、扩增区，使用带滤芯枪头。
质量控制：
阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。
避免反复冻融试剂或样本。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；交叉污染可能导致假阳性。
仅限科研使用，结果需结合其他方法验证。
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