产品基本信息
规格：50T/盒（50次反应）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
适用范围：科研用途（非临床），适用于常山（Radix dichroae）DNA的定性及定量检测。
产品名称 | 常山探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Dichroae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5173 |
技术原理与特点
探针法原理：
采用5'端标记荧光报告基团、3'端标记淬灭基团的探针，通过Taq酶切割探针释放荧光信号，实时监测扩增产物量。
定量分析基于标准曲线法（Ct值与模板浓度的对数线性关系）。
核心特点：
高特异性：引物与探针针对常山保守序列设计，无交叉反应。
高灵敏度：检测下限达10~100拷贝/μL（）或10 ng DNA。
快速简便：预混试剂，操作时间约3小时，支持直接电泳。
防污染设计：含dUTP/UNG酶系统（部分品牌），降低假阳性风险。
试剂盒组分
| 成分 | 规格（示例） | 功能说明 |
| qPCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |
| 酶混合液 | 50-100 μL | 含Taq酶、逆转录酶等 |
| 引物-探针混合液 | 100 μL | 特异性扩增目标序列 |
| 阳性对照 | 50 μL（1×10^8拷贝/μL）| 验证实验有效性 |
| 模板稀释液 | 1 mL | 标准品梯度稀释 |
操作步骤
标准曲线制备：
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1~10^7拷贝/μL），独立分区操作避免污染。
样本处理：
使用兼容的DNA提取试剂盒制备模板，建议设置阴性/阳性对照。
PCR反应体系（20 μL/反应）：
缓冲液 10 μL
酶混合液 2 μL
引物-探针 2 μL
模板DNA 5 μL
扩增程序：
逆转录：50℃ 30 min（若需RNA检测）
预变性：94℃ 10 min
循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（40循环，FAM通道采集信号）
结果判读
定量分析：以标准曲线计算样本拷贝数。
定性分析：
阳性：Ct值≤35或≤39，且扩增曲线呈S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
避免污染：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸清洁台面。
质量控制：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30方为有效。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
提取效率差异影响定量准确性。
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