火麻仁探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 火麻仁探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus cannabis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5081 |
产品原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光强度增长（ΔRn）与循环阈值（Ct值），实现对火麻仁核酸的准确定量。
产品特点
高特异性：引物与探针针对火麻仁保守序列设计，无交叉反应。
高灵敏度：检测下限可达几百拷贝/反应。
即开即用：预混缓冲液与酶体系，仅需加入模板RNA和引物探针。
内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），便于区分假阴性。
防污染：一管式闭管操作，避免扩增产物污染。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能说明 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 含dNTPs、Mg²⁺、稳定剂等 |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |
| 荧光PCR探针 | 50μL | 靶标特异性探针（FAM标记）|
| 引物混合液 | 100μL | 特异性引物对 |
| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL） | 标准曲线制备与质控 |
| 模板稀释液 | 1mL | 标准品梯度稀释 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），每个梯度设3复孔。
2. 样品RNA提取
使用兼容的RNA提取试剂盒，建议设置阴性对照（NC）与阳性对照（PC）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA | 5 |
| 总体系 | 20 |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品拷贝数。
定性判定：
阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈S型。
可疑：35 < Ct < 40，需复测确认。
阴性：Ct ≥ 40或无扩增。
注意事项
实验分区操作（试剂准备区、样品处理区、扩增区），避免污染。
探针避光保存，反复冻融≤3次。
阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。
本产品仅限科研使用，临床诊断需经国家监管部门批准。
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