产品基本信息
包装规格：50次/盒（20 μL体系）
用途：科研实验（定性/定量检测三七特异性DNA片段）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月
运输条件：低温运输（冰袋或干冰）
产品名称 | 三七探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Notoginseng Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4995 |
试剂盒组成
PCR反应预混液：含荧光探针、引物、dNTPs、Taq酶等。
阳性对照：86 bp DNA片段（无传染性，浓度1×10^8拷贝/μL）。
模板稀释液：用于标准曲线制备。
阴性对照：无核酸酶水。
可选附件：DNA提取试用装。
实验操作流程
1. 样品DNA制备
使用自选方法或配套DNA提取试剂盒纯化样品DNA。
建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）以监控提取过程。
2. 标准曲线制备（定量检测需进行）
标记6支离心管（编号6至1），每管加入45 μL模板稀释液。
梯度稀释阳性对照：
6号管：5 μL原液（1×10^8拷贝/μL）→ 1×10^7拷贝/μL。
依次稀释至1号管（1×10^2拷贝/μL），每次更换枪头。
稀释后的标准品置于冰上备用。
3. qPCR反应体系（20 μL/管）
| 组分 | 体积（μL） |
| PCR预混液 | 10 |
| 模板DNA/标准品 | 5 |
| 无核酸酶水 | 5 |
注意：
阴性对照以水替代模板。
阳性对照最后添加，避免污染。
不同仪器需调整ROX参比染料（如ABI 7500需添加，LightCycler480无需）。
4. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 1 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 30 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 15 sec | |
5. 数据采集与分析
荧光通道：激发光471 nm，发射光530 nm（FAM探针）。
定量分析：以Ct值为纵轴，阳性对照log浓度为横轴绘制标准曲线，计算样品浓度。
定性判定：
阳性：Ct≤36，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct≥40或无Ct值。
可疑：36<Ct<40，需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
仪器兼容性：适用于主流qPCR仪（ABI系列、Bio-Rad、Roche等）。
废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。
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