虎杖探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 虎杖探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Rhizoma Polygoni Cuspidati Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5091 |
产品特点
高特异性：引物基于虎杖高度保守区设计，无交叉反应。
高灵敏度：较常规PCR灵敏度提升100倍，可检测低至3个拷贝的靶基因。
即开即用：预混优化引物、酶及反应体系，仅需提供DNA模板。
质控完善：含无传染性阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，避免假阴性。
快速便捷：2-4小时内完成扩增，支持荧光定量分析（探针法）。
组成成分
核心组分：
预混PCR MasterMix（含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液）
虎杖特异性引物及探针混合液
阳性对照（冻干DNA片段）
阴性对照（无模板对照）
核酸释放剂（可选，用于粗提样本）
辅助试剂：
样品稀释液、标准品（冻干品，需临用前配制）
酶标板（96孔，部分型号含）
操作步骤
1. 样本DNA制备
纯化样本DNA（兼容多数核酸提取试剂盒），建议设置阴/阳性提取对照。
2. 标准曲线制备（定量分析适用）
将阳性对照梯度稀释（10^2-10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
3. qPCR反应体系（20μL/管）
按以下比例配制：
预混液10μL + 模板DNA 5μL + 超纯水补至20μL。
程序设置：
预变性：95℃ 5分钟；
循环：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光），40循环；
融解曲线分析：60℃-95℃（排除非特异扩增）。
结果分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性判断：
阳性：Ct≤25，明显扩增曲线；
可疑：25<Ct<30，需复测确认；
阴性：Ct≥30或无Ct值。
注意事项
分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区），避免气溶胶污染。
试剂解冻后需涡旋混匀，短暂离心后使用。
反复冻融不超过3次，建议分装保存。
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
质量控制
阴性对照：Ct≥40或无扩增；
阳性对照：Ct≤25且扩增曲线典型；
否则实验无效，需排查原因。
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