红参探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 红参探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Ginseng Rubra Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5093 |
产品概述
本产品为红参(Radix ginseng rubra)探针法PCR鉴定试剂盒，采用实时荧光定量PCR技术，专为红参的分子鉴定而设计。该试剂盒基于TaqMan探针原理，具有高灵敏度和特异性，适用于科研用途的红参鉴定。
产品规格
产品规格：50T/盒
保存温度：-20℃
保质期：12个月
技术原理
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团并被磷酸化以防止延伸。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'核酸外切酶活性切割与靶序列结合的探针，使报告基团与淬灭基团分离并发出荧光。通过实时监测荧光信号强度变化，可对样本进行定量和定性分析。
产品特点
即开即用，用户只需提供样品DNA模板
引物和探针经过优化，灵敏度高
提供阳性对照(1×10⁸拷贝/μL)，便于区分假阴性样品
特异性强，引物基于红参高度保守区设计，不与相近物种发生交叉反应
可用于定性和定量检测，定量检测线性范围至少5个数量级
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qPCR酶混合液 | 50-100μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| PCR引物-探针混合液 | 100μL |
| qRT-PCR探针 | 50μL |
| 阳性对照(1×10⁸拷贝/μL) | 50μL |
| 产品说明书 | 1份 |
使用方法
标准曲线样品制备
标记6个离心管为7-2号
各管加入45μL模板稀释液
7号管加入5μL阳性对照，震荡混匀得1×10⁷拷贝/μL标准品
依次稀释至1×10²拷贝/μL，冰上保存备用
样品DNA制备
建议设置N+2个提取(N为样品数，含阳性和阴性对照)
使用自选方法或配套试剂提取DNA
PCR反应设置(20μL体系)
| 成分 | 样品管(N+2) | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| qPCR缓冲液 | 各10μL | 10μL | 各10μL |
| 酶混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |
| 探针 | 各1μL | 1μL | 各1μL |
| 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |
| 样品DNA | 各5μL | - | - |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
| 标准品 | - | - | 各5μL |
PCR反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30min |
| 预变性 | 94℃ | 10min |
| 扩增(40循环) | 94℃ | 15sec |
| | 60℃ | 1min(采集FAM荧光) |
结果分析
定量分析
以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线
根据样品Ct值推算核酸浓度
定性分析
阴性对照：Ct≥40
阳性对照：Ct≤30-39且有典型扩增曲线
样品判定：
Ct≤35：阳性
Ct≥40：阴性
35<Ct<40：需重复检测
注意事项
操作需在不同区域进行以避免交叉污染
使用一次性耗材和防护装备
试剂使用前应完全融化并混匀
反应液需避光保存
实验后需对工作台和仪器进行消毒处理
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断
保存与运输
保存条件：-20℃避光保存
运输条件：低温运输(冰袋或干冰)
局限性
检测结果受样本采集、处理、保存条件影响
操作不当可能导致假阳性或假阴性结果
病原体基因变异可能导致假阴性
不同提取方法效率差异可能影响结果
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