合欢皮探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 合欢皮探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Cortex Albiziae Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5100 |
检测原理
采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术：
针对合欢皮高度保守的基因组DNA序列设计特异性引物和荧光探针
探针5'端标记FAM荧光基团，3'端标记淬灭基团，PCR扩增过程中Taq酶切割探针释放荧光信号
实时监测荧光信号强度，通过Ct值判断样本中是否存在合欢皮DNA
可用于定性和定量检测：定性检测用于药材真伪鉴别，定量检测用于混伪品含量分析
关键性能指标
特异性：引物和探针针对合欢皮高度保守区设计，不会与其他植物DNA发生交叉反应，如合欢花、苦楝皮等易混药材
灵敏度：最低检测限可达100拷贝/μL，可检测低至0.1ng的合欢皮DNA
检测时间：从DNA提取到出具报告仅需2-3小时
线性范围：10²-10⁸拷贝/μL，可用于定量分析混伪品含量
重复性：批内、批间变异系数均＜5%
防污染体系：含UNG酶-dUTP系统，有效防止PCR产物交叉污染
临床应用场景
适用人群
中药材生产企业：合欢皮药材真伪鉴别，原料质量控制
药品监管部门：中药材市场监管，打击假冒伪劣产品
科研机构：中药材分子鉴定方法研究，中药资源保护
医院药房：中药饮片质量控制，保障临床用药安全
临床价值
快速鉴定：比传统形态学、显微鉴定方法更快速、准确
早期鉴别：可在药材加工前进行鉴别，避免经济损失
微量检测：可检测微量样品，如粉末、炮制品等
定量分析：可定量检测混伪品含量，评估药材质量
标准化：建立标准化的分子鉴定方法，提高中药材鉴定的准确性和可靠性
产品组成
| 成分 | 规格 | 主要功能 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及热启动DNA聚合酶 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释及样本处理 |
| 合欢皮qRT-PCR引物混合液 | 100μL | 特异性扩增目标序列 |
| 合欢皮qRT-PCR探针 | 50μL | FAM通道荧光信号标记 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线建立及质控 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
自备试剂：待测样本RNA（推荐使用柱式提取法纯化）。
储存及运输
储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
运输条件：低温干冰运输。
实验步骤
1. 标准曲线制备
使用阳性对照进行10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），标记6管（2~7号），每管加入5μL上一步稀释液至45μL稀释液，冰上操作以避免污染。
2. RNA样本制备
建议设置N+2个样本（含阴/阳性对照），使用兼容的RNA提取试剂盒纯化，阴性对照以水替代模板。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样本管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 模板RNA | 5μL | - | - |
| 标准品 | - | - | 5μL |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 40循环 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量分析：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本拷贝数。
定性分析：阴性对照Ct≥40，阳性对照需有显著荧光信号。
注意事项
分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），避免交叉污染。
探针避光保存，反复冻融不超过3次。
本试剂盒阳性对照为无传染性DNA片段，不可替代临床标准品。
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