技术原理
采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术：
探针设计：针对秦皮保守基因序列设计特异性引物及探针，探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。
信号检测：PCR扩增时，Taq酶切割探针释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶序列的定量分析。
高特异性：引物与探针经优化，避免与其他病原体交叉反应。
用途：科研用途，用于秦皮核酸的定性或定量检测，不可用于临床诊断。
产品名称 | 秦皮探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Cortex Fraxini Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5007 |
试剂盒组成
| 成分 | 规格/功能 |
| qPCR缓冲液 | 500μL（提供反应体系基础环境） |
| 酶混合液 | 100μL（含逆转录酶、Taq DNA聚合酶）|
| 引物混合液 | 100μL（特异性扩增秦皮靶序列） |
| TaqMan探针 | 50μL（标记荧光基团） |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL（人工合成DNA标准品） |
| 模板稀释液 | 1 mL（用于标准曲线制备） |
操作步骤
1. 标准曲线制备（定量分析需执行）
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度单独使用带滤芯枪头操作，避免污染。
2. 样本处理
使用商品化RNA/DNA提取试剂盒制备模板，建议设置阴性对照（超纯水）和阳性对照（试剂盒提供）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| TaqMan探针 | 1μL |
| 模板RNA/DNA | 5μL |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集 |
| 逆转录（若需） | 50℃ | 30 min | 否 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 否 |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec | 否 |
| | 60℃ | 1 min | FAM通道 |
结果判读
定量分析：以标准曲线Ct值计算样本拷贝数。
定性分析：
阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈S型；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免气溶胶污染。
防污染措施：使用滤芯吸头、定期清洁台面（10%次氯酸或75%乙醇）。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
冻存要求：避免反复冻融（≤7次），分装保存。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler等）。
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