海金沙探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 海金沙探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Spora Lygodii Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5105 |
产品用途
科研用途，适用于海金沙的定性及定量检测，不可用于临床诊断。
产品特点
高灵敏度：引物与探针针对海金沙高度保守区设计，灵敏度较常规PCR高100倍。
特异性强：无交叉反应，可准确区分其他微生物DNA。
便捷性：即开即用，仅需提供DNA模板。
安全对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照，避免假阴性。
一管式操作：闭管检测，减少污染风险。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| qPCR缓冲液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 50-100μL|
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 引物-探针混合液 | 50-100μL |
| 阳性对照（1×10⁷-10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（以10倍稀释为例）
标记离心管（7-2号），每管加45μL稀释液。
依次梯度稀释阳性对照（起始浓度1×10⁸拷贝/μL），获得6个浓度标准品（10⁷-10²拷贝/μL）。
2. 样品DNA提取
建议设置N+2个样本（含阴/阳性对照），使用兼容的核酸提取试剂盒纯化DNA。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物-探针混合液 | 2 |
| 模板DNA | 5 |
4. 反应程序
预变性：94℃ 10分钟；
40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）。
数据分析
定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤35且扩增曲线典型；
阴性：Ct≥40；
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
重复检测：可疑结果需复测，扩增曲线不明显者判为阴性。
废物处理：实验废弃物需按生物安全规范消毒（如10%次氯酸）。
局限性
检测结果受样本质量、提取方法及操作规范影响；
病原体变异可能导致假阴性；
试剂保存不当或配制误差可能影响灵敏度。
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