海藻探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 海藻探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Sargassum Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5103 |
检测原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法原理：
探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：通过监测扩增过程中荧光信号的增长，实现对靶标RNA的定量和定性检测。
三步流程：
反转录：将RNA模板逆转录为cDNA。
扩增：特异性引物与探针结合靶序列进行PCR扩增。
检测：实时采集荧光信号（FAM通道）。
产品特点
高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应。
高特异性：引物针对海藻保守序列设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，仅需提供样品RNA。
内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），便于排除假阴性。
适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 试剂四 | 海藻探针法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 试剂五 | 海藻qRT-PCR探针 | 50μL |
| 试剂六 | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（10²~10⁷拷贝/μL梯度稀释）
使用阳性对照按10倍梯度稀释，独立操作避免污染。
2. RNA提取
建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），推荐使用柱式RNA提取试剂盒。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| 缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| RNA模板 | 5μL | - | - |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
| 标准品 | - | - | 5μL |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：
阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。
样品Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35<Ct<40需复测。
注意事项
操作分区进行，避免气溶胶污染。
探针避光保存，避免反复冻融。
本产品严禁用于临床诊断。
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