广防己探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 广防己探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Aristolochiae Fangchi Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5108 |
产品概述
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于广防己（Radix aristolochiae fangchi）的特异性核酸鉴定，适用于科研领域（不可用于临床）。通过优化设计的引物与探针，结合Taq酶的5'核酸外切酶活性，实现高灵敏度和高特异性的检测，可同时完成定性与定量分析。
检测原理
探针法基于实时荧光定量PCR技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶切割探针释放荧光信号。
信号检测：通过监测扩增过程中荧光强度的增长，实现对起始模板的定量（Ct值）与定性分析。
产品特点
高灵敏度：检测限低至1×10^2拷贝/μL。
高特异性：引物针对广防己保守序列设计，避免交叉反应。
便捷性：即开即用，兼容常规RNA/DNA提取方法。
质控完善：含阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照。
试剂盒组分
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| qPCR酶混合液 | 50-100μL | 含逆转录酶及Taq酶 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照 |
| 引物-探针混合液 | 100μL | 特异性扩增靶序列 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。
2. 样本处理
提取待测样本RNA/DNA，建议设置阴性（NC）和阳性对照（PC）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物-探针混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板DNA/RNA | 5 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
|------|------|------|
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
结果分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈指数增长。
可疑：35<Ct<40，需复测确认。
阴性：Ct≥40或无扩增。
注意事项
分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），避免交叉污染。
使用带滤芯枪头，试剂避免反复冻融。
阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。
实验废弃物需按生物安全规范处置。
免责声明
本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断或其他非科研用途。
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