防已探针法PCR鉴定试剂盒

防已探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品特点

高特异性：

采用防己特异性引物及探针，靶向保守基因序列，无交叉反应。

探针法荧光定量技术，灵敏度达1000拷贝/反应，可检测微量模板。

操作便捷：

预混试剂含Taq酶、dNTPs、缓冲液等，用户仅需加入模板DNA和引物。

支持一管式扩增（RT-PCR可选），减少操作污染风险。

质控完善：

提供阳性质控品（Ct≤35）和阴性质控品（Ct=40或无Ct），确保实验有效性。

适用范围：

适用于中药材、提取物或临床样本中防己成分的定性鉴定（科研用途）。

试剂盒组分

| 成分 | 规格（50次反应） | 功能说明 |

| PCR预混液（2×） | 1 mL | 含Taq酶、dNTPs、Mg²⁺等 |

| 防己特异性引物探针 | 100 μL | 冻干粉或液体形式 |

| 阳性质控DNA | 50 μL（1×10⁸拷贝/μL） | 验证实验有效性 |

| 核酸释放剂（选配） | 20次试用装 | 辅助样本前处理 |

| 超纯水 | 1 mL | 稀释或阴性对照 |

实验步骤

1. 样本前处理

DNA提取：

使用商品化核酸提取试剂盒或试剂盒配套释放剂，按标准流程提取样本DNA。

建议设置提取阴/阳性质控（如：阳性对照稀释液+水）。

2. PCR反应体系（20-25 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× PCR预混液 | 10 |

| 引物探针混合液 | 1 |

| 模板DNA | 2-5 |

| 超纯水 | 补足至20 |

3. 扩增程序（以ABI 7500为例）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 35 |

| 退火/延伸 | 57-60℃ | 15 sec | |

| 荧光采集 | 60℃ | 40 sec | |

4. 结果分析

阈值设定：以阴性对照扩增曲线高点为基准。

判读标准：

阳性：Ct＜38，明显指数扩增。

可疑：38≤Ct＜40，需复测确认。

阴性：Ct≥40或无扩增曲线。

注意事项

防污染措施：

分设试剂配制区、样本处理区及扩增区，使用带滤芯吸头。

实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

重复冻融：预混液解冻后需短暂离心，避免反复冻融（≤3次）。

无效实验处理：若阴性质控出现扩增或阳性对照无信号，需排查污染或试剂失效。

公司正在出售的产品