瓜蒌子探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 瓜蒌子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen trichosanthis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5109 |
检测原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法（TaqMan原理）对瓜蒌子特异性基因序列进行高灵敏度检测。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实现扩增与检测同步进行。
产品组成
探针法qPCR缓冲液（500μL）
qPCR酶混合液（含逆转录酶、Taq DNA聚合酶，100μL）
荧光PCR模板稀释液（1mL）
瓜蒌子特异性引物混合液（100μL）
瓜蒌子特异性探针（50μL）
阳性对照（1×10^8拷贝/μL，50μL）
说明书（1份）
实验步骤
标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。
标记离心管（7号~2号），依次加入45μL稀释液和5μL上一梯度样本，涡旋混匀后冰上保存。
样本RNA提取
样本类型：组织、细胞、血液等（需避免DNA或RNA直接提供，建议提取新鲜样本）。
保存要求：液氮、-80℃或Trizol中保存。
阴性/阳性对照：设置NC（超纯水）和PC（阳性对照稀释液）。
qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 特异性探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 样本RNA/DNA | 5 |
| 总体系 | 20 |
反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min |（采集FAM信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本拷贝数。
定性检测：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct≥40或无扩增。
可疑（35<Ct<40）：需重复检测。
产品特点
高特异性：引物/探针针对瓜蒌子保守序列设计，经40+近缘种验证无交叉反应。
高灵敏度：最低检出限10^3拷贝/μL，无需预增菌。
稳定性：批内/批间变异系数<5%。
快速检测：全程约3-4小时。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行。
避免污染：使用带滤芯枪头，定期紫外线消毒台面及移液器。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
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