钩藤探针法PCR鉴定试剂盒

钩藤探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品特点

高灵敏度与特异性：针对钩藤保守序列设计引物及探针，灵敏度达几百拷贝/反应，避免与其他物种交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，用户仅需提供样品DNA/RNA模板。

双重质控：含阴性质控品（无扩增曲线/Ct值≥40）和阳性质控品（Ct值≤32，典型扩增曲线）。

一管式检测：荧光定量PCR体系（20μL/反应），闭管操作减少污染风险。

应用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 组分名称 | 规格/含量 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 探针法酶混合液 | 100 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 钩藤特异性引物混合液 | 100 μL |

| 钩藤探针（FAM标记） | 50 μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

（一）标准曲线制备（10^2~10^7拷贝/μL梯度稀释）

标记离心管（7~2号），每管加45 μL稀释液。

7号管加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），涡旋混匀得10^7拷贝/μL标准品，依次稀释至10^2拷贝/μL。

（二）样品核酸提取

建议设置N+2样本（含阴/阳性对照）。

使用兼容的DNA/RNA提取试剂盒，纯化后-20℃暂存。

（三）qPCR反应体系（20 μL/管）

| 组分 | 样品管/标准曲线管 | 阴性对照管 |

| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL |

| 模板（样品/标准品） | 5 μL | — |

| 超纯水 | — | 5 μL |

（四）扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 40循环 | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样品浓度。

定性判定：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线。

阳性：Ct≤36且曲线呈指数增长。

可疑值（36<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

防污染：实验分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区），使用带滤芯枪头。

质控要求：若阳性质控Ct>32或阴性质控出现扩增，实验无效。

试剂稳定性：避免反复冻融，解冻后短暂离心混匀。

样本处理：避免RNA降解（使用RNase-free耗材）。

公司正在出售的产品