鸡血藤探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 鸡血藤探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Caulis Spatholobi Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5079 |
检测原理
基于实时荧光定量PCR技术，采用TaqMan探针法：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光强度随扩增循环数的增长（Ct值），实现对目标RNA/DNA的定量和定性检测。
产品特点
高灵敏度与特异性：引物及探针针对鸡血藤高度保守区域设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶混合液及优化引物探针，用户仅需提供样品RNA模板。
内置对照：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，便于结果判读。
双重应用：支持定性和定量检测，线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格/包装量 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 酶混合液（含逆转录酶） | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 鸡血藤引物混合液 | 100μL |
| TaqMan探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |
| 使用说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（以10倍梯度稀释为例）：
标记6管，依次稀释阳性对照至10^6–10^1拷贝/μL，独立操作避免污染。
2. 样品RNA提取：
建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），推荐使用柱式RNA提取试剂。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）：
| 组分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA/标准品/对照 | 5 |
4. 反应程序：
逆转录：50℃ 30分钟 → 预变性：94℃ 10分钟 → 40循环（94℃ 15秒，60℃ 1分钟，采集FAM信号）。
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性判定：
阳性：Ct≤36，典型S型扩增曲线；
阴性：Ct≥40或无信号；
可疑（36<Ct<40）：需复检确认。
注意事项
实验分区操作，避免气溶胶污染。
试剂解冻后需混匀，短暂离心后使用。
探针避光保存，反复冻融不超过3次。
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