产品概述
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法特异性检测枇杷叶（Eriobotrya japonica）的核酸序列。适用于科研领域中对枇杷叶成分的定性及定量分析，具有高灵敏度、高特异性和操作便捷等特点。
产品名称 | 枇杷叶探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Folium Eriobotryae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5019 |
产品组成
探针法qRT-PCR缓冲液（500 μL）
探针法qRT-PCR酶混合液（100 μL，含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂等）
荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）
枇杷叶特异性引物混合液（100 μL）
枇杷叶qRT-PCR探针（50 μL，5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团）
阳性对照（50 μL，1×10⁸拷贝/μL，无传染性DNA片段）
说明书（1份）
技术参数
检测原理：探针法通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增进程。
灵敏度：可检测低至3个拷贝的靶序列。
特异性：引物及探针针对枇杷叶高度保守区设计，避免交叉反应。
扩增效率：标准曲线R²≥0.99，扩增斜率3.3~3.8。
适用样本：粗提DNA/RNA、组织、细胞等（需自备提取试剂）。
操作流程
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于定量分析。
2. 反应体系配置（20 μL/管）
| 成分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板RNA/DNA | 5 |
| 超纯水 | 补足至20 |
3. PCR程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃→60℃ | 15 sec→1 min（采集荧光） |
结果判读
定量分析：根据标准曲线计算样本拷贝数。
定性分析：
阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。
可疑：Ct值35~40，需复测。
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
注意事项
样本处理：避免反复冻融，建议使用液氮或Trizol保存。
防污染：分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。
质量控制：每批次实验需包含阴性对照（超纯水）和阳性对照。
适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
储存与运输
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
运输方式：低温干冰运输。
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