女贞子探针法PCR鉴定试剂盒

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测女贞子特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。当Taq酶在扩增过程中切割探针时，报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶序列的定性与定量分析。

产品组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq DNA聚合酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释及阴性对照 |

| 女贞子引物混合液 | 100μL | 特异性扩增靶序列 |

| 女贞子荧光探针 | 50μL | 靶序列检测与信号释放 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备及质控 |

| 说明书 | 1份 | 操作流程及数据分析 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

标记6管，依次稀释阳性对照（10⁷–10²拷贝/μL梯度），每步用45μL稀释液与5μL上一步产物混合，震荡后冰上保存。

2. 样品RNA提取

建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照），采用兼容的RNA提取试剂纯化模板。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| RNA模板/水/标准品 | 5 | 5（水） | 5（梯度标准品） |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤35，典型扩增曲线；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作需在独立区域进行，避免交叉污染。

保存条件：-20℃避光，避免反复冻融。

阳性对照为无传染性DNA片段，无需生物安全顾虑。

公司正在出售的产品