诃子探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 诃子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus Chebulae Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5096 |
产品原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，采用探针法检测原理：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：通过监测扩增过程中荧光强度的实时变化，实现对目标RNA/DNA的定量及定性检测。
产品特点
高灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶序列。
高特异性：引物及探针针对诃子保守序列设计，无交叉反应。
即开即用：用户仅需提供样品RNA模板，操作简便。
内控对照：提供阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），避免假阴性结果。
适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 诃子探针法引物混合液 | 100 μL |
| 诃子qRT-PCR探针 | 50 μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |
| 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于建立定量标准曲线。
2. 样品RNA提取
建议使用柱式病毒RNA提取试剂盒，或兼容的其他RNA纯化方法。
3. qRT-PCR反应体系（20 μL/反应）
| 成分 | 体积 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL |
| 酶混合液 | 2 μL |
| 探针 | 1 μL |
| 引物混合液 | 2 μL |
| 样品RNA/标准品 | 5 μL |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈典型S型。
阴性：Ct ≥ 40。
可疑（35<Ct<40）：需重复检测确认。
注意事项
操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。
试剂解冻后需充分混匀，短暂离心后使用。
阳性对照需最后加入，并单独存放。
废弃物料需按生物危害品处理。
声明：本产品仅限科研使用，严禁用于临床诊断或其他非科研用途。
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