佛手探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 佛手探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus Citri Sarcodactylis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5125 |
产品概述
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于佛手（Fructus citri sarcodactylis）的核酸定性及定量检测。通过特异性引物和探针设计，结合Taq酶的5'核酸外切酶活性，实现对目标序列的高灵敏度、高特异性扩增，并实时监测荧光信号。适用于科研用途，严禁用于临床诊断。
产品组成
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |
| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50-100 μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50次反应 |
| 试剂五 | PCR阳性对照（10^7-10^8拷贝/μL） | 50 μL |
操作步骤
1. 标准曲线制备
标记6管离心管（6至1号），每管加45 μL模板稀释液。
依次梯度稀释阳性对照（10倍稀释），获得10^6-10^1拷贝/μL标准品。
2. 样品DNA/RNA提取
建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。
使用兼容的核酸提取试剂盒纯化样本。
3. qPCR反应体系（20 μL）
| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| 探针及引物混合液 | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
| 模板DNA/RNA | 5 μL | — | — |
| 标准品/超纯水 | — | 5 μL | 5 μL |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线明显。
阴性：Ct ≥ 40。
灰区（35<Ct<40）：需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；运输需使用冰袋（2-8℃）。
局限性：
结果受样本质量、提取方法及操作规范影响。
基因变异可能导致假阴性；污染可能导致假阳性。
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