产品原理

本试剂盒采用实时荧光定量PCR(qPCR)探针法技术,通过Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性,水解与靶序列结合的荧光标记探针。探针5'端标记报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团,扩增过程中荧光信号与产物累积量成正比,实现高特异性、高灵敏度的核酸定量检测。
产品名称 | 明党参探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Changii Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5032 |

产品特点

高特异性:引物及探针基于明党参保守序列设计,无交叉反应。
高灵敏度:检测限可达几百拷贝/反应。
即开即用:预混缓冲液与酶体系,仅需提供RNA模板。
内置对照:含阳性对照(1×10⁸拷贝/μL),便于区分假阴性。
适用范围:仅限科研用途,不可用于临床诊断。
试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 反应体系基础液 |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq酶 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释 |
| 明党参引物混合液 | 100μL | 特异性扩增引物 |
| 明党参qRT-PCR探针 | 50μL | 荧光标记探针 |
| 阳性对照(1×10⁸拷贝/μL) | 50μL | 标准曲线制备 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
操作步骤

1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释(10²~10⁷拷贝/μL),冰上操作避免污染。
2. RNA提取
使用兼容的RNA提取试剂纯化样本,建议设置阴/阳性对照(如超纯水与阳性对照稀释液)。
3. qRT-PCR反应
反应体系(20μL/管):
缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物混合液2μL + 模板RNA 5μL。
反应程序:
逆转录:50℃ 30 min → 预变性:94℃ 10 min → 40循环(94℃ 15 sec → 60℃ 1 min,采集FAM信号)。
4. 数据分析
定量分析:以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴,计算样本浓度。
定性分析:Ct≤35为阳性,≥40为阴性;35<Ct<40需复测。
注意事项

操作需在无菌环境下进行,避免交叉污染。
试剂解冻后需充分混匀,短暂离心后使用。
阳性对照需最后加入,防止气溶胶污染。
废弃组分需按生物危害物处理。
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