检测原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法原理：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与目标DNA特异性结合。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光强度变化，实时计算Ct值，实现对党参DNA的定性和定量检测。
产品名称 | 党参探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Codonopsis Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5146 |
产品特点
高特异性：引物及探针针对党参保守基因序列设计，避免交叉反应。
高灵敏度：可检测低至10^2拷贝/μL的模板浓度。
便捷性：预混试剂（含缓冲液、酶、引物、探针），即开即用。
质控保障：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，确保结果可靠性。
适用范围：适用于科研用途（如药材鉴定、物种溯源），不可用于临床诊断。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 党参引物混合液 | 100μL |
| 党参探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）
使用阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样品RNA提取
推荐使用柱式RNA提取试剂盒，制备阴性（NC）和阳性对照（PC）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA | 5 |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct ≥ 40或无扩增。
可疑（35<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
操作需在无菌环境下进行，避免RNA降解。
不同批次试剂避免混用，反应体系需避光。
废弃组分按生物危害品处理。
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