犬轮状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

犬轮状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，专用于犬轮状病毒（Canine Rotavirus, CRV）核酸的体外定性或定量检测。适用于粪便、鼻咽拭子、血液及组织样本中的病原体检测，具有高灵敏度（最低检出限10 copies/Test）和特异性（99.11%），并内置内参基因（如GAPDH）以控制实验质量。

技术原理

探针法设计：

针对CRV保守基因区域设计特异性引物及TaqMan探针（5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团）。

PCR扩增时，Taq酶切割探针释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶标定量。

质量控制：

内标基因（如GAPDH）监控样本提取及扩增效率，避免假阴性。

预分装冻干微球或即用型液体配方，减少操作误差。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（50T/盒） | 功能说明 |

| PCR反应液 | 1000 μL | 含dNTPs、Mg²⁺、缓冲体系 |

| 探针及引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增CRV靶序列 |

| 阳性对照 | 40 μL (1×10⁸ copies/μL) | 标准曲线建立及质控 |

| 阴性对照 | 40 μL | 污染监测 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

操作步骤

样本处理：

使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样本核酸，避免RNA降解（操作需在0-4℃下进行）。

试剂配制：

按反应数（n=样本数+阴/阳性对照）分装PCR反应液（20 μL/管），加入5 μL模板。

PCR扩增：

程序设置：

逆转录：50℃ 30 min（若检测RNA）；

预变性：95℃ 3 min；

40循环扩增：95℃ 5 sec → 55℃ 40 sec（FAM通道采集信号）。

数据分析：

定量分析：通过标准曲线（10²~10⁷ copies/μL梯度）计算样本病毒载量。

定性分析：Ct值≤35判为阳性，≥40判为阴性；35-40需复检。

性能参数

灵敏度：10 copies/Test（R²≥0.998，扩增效率95.9%）。

特异性：与犬瘟热病毒、犬细小病毒等常见病原体无交叉反应。

稳定性：-20℃保存12个月，避免反复冻融。

注意事项

分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），防止污染。

使用无核酶耗材，避免RNA降解。

不同批号试剂不可混用，阳性对照需单独存放。

废弃物品需经10%次氯酸处理或高压灭菌。

适用范围

科研用途：适用于实验室对犬轮状病毒的分子流行病学研究。

临床辅助诊断：需结合临床症状及其他检测结果综合判断。

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