检测原理
基于探针法荧光定量RT-PCR技术，针对禽轮状病毒A组高度保守基因区域设计特异性引物及探针，通过实时荧光信号扩增实现病毒核酸的定性与定量检测。
灵敏度：最低检测限达100拷贝/反应。
特异性：不与禽类其他病原体核酸发生交叉反应。
线性范围：定量检测覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
产品名称 | 禽轮状病毒A组探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Avian Rotavirus Group A Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4842 |
试剂盒组成
| 成分 | 规格/说明 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 酶混合液 | 50μL（含逆转录酶、Taq酶） |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 引物-探针干粉 | 50T |
| 阳性对照（无传染性）| 50μL（10^7拷贝/μL） |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^6–10^1拷贝/μL），独立操作避免污染。
标记离心管（6–1号），依次加入稀释液与阳性对照，涡旋混匀后冰上保存。
2. 样本处理
核酸提取：推荐使用兼容的DNA提取试剂盒，设置阴性（NC）和阳性对照（PC）。
PC制备：用阳性对照稀释液模拟样本体积。
3. PCR反应体系（20μL）
每反应包含：10μL缓冲液、0.5μL酶混合液、1μL引物-探针、2μL模板DNA、6.5μL无核酸酶水。
反应程序：
逆转录：50℃ 10分钟
预变性：95℃ 10分钟
PCR循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）
结果分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本拷贝数。
定性检测：
阳性：Ct≤39，且扩增曲线典型。
阴性：Ct≥40或无扩增。
可疑值（39<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、PCR扩增需在独立区域进行，防止污染。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
保存条件：试剂-20℃避光保存，运输需冰袋（2–8℃），避免反复冻融。
局限性：
突变株可能导致假阴性；
样本质量影响检测准确性。
声明
本产品仅用于科研，不可作为临床诊断依据。操作需符合实验室生物安全规范，废弃物按《微生物实验室生物安全通则》处理。
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关键字： 禽轮状病毒A组;染料法荧光定量;PCR试剂盒;