鼠附红细胞体（鼠嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 鼠附红细胞体（鼠嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Eperythrozoon coccoides Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5255 |
预期用途
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于检测鼠附红细胞体（鼠嗜血支原体）核酸，适用于科研领域对感染样本的定性或定量分析，不适用于临床诊断。
检验原理
采用TaqMan探针技术，针对病原体基因保守区域设计特异性引物及探针。通过实时监测PCR扩增过程中的荧光信号，实现对靶标核酸的高灵敏、高特异性检测。分析灵敏度可达100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级。
试剂组成
扩增液（25μL/管）
反应液（975μL/管）
阳性质控品（人工合成DNA片段，50μL/管）
阴性质控品（50μL/管）
说明书
储存与运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。
有效期：12个月。
运输：低温（-20℃）泡沫箱加冰密封运输。
适用仪器
兼容ABI系列、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。
样本要求
样本类型：全血、血清、组织（肠道等）、拭子或病毒培养物。
保存与运输：短期-20℃保存，长期需-70℃；运输时使用2~8℃冰袋。
实验步骤
核酸提取：推荐使用商品化DNA提取试剂盒，避免交叉污染。
试剂配制：
反应体系（20μL/管）：19.5μL反应液 + 0.5μL扩增液 + 5μL模板DNA。
标准曲线制备：6个10倍梯度稀释的阳性质控品（10^1~10^6拷贝/μL）。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 3分钟；
40个循环：95℃ 15秒 → 55℃ 30秒（采集荧光信号）。
结果判读
阳性：Ct值≤35且扩增曲线典型。
可疑：35<Ct≤38，需复测确认。
阴性：无Ct值或Ct>38。
质控要求：阴性对照无扩增；阳性对照Ct≤30。
注意事项
分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区），避免污染。
使用滤芯吸头及无核酸酶耗材。
反应液避光保存，避免气泡干扰。
实验后需用10%次氯酸或75%酒精清洁工作台。
性能指标
灵敏度：100拷贝/反应。
特异性：与常见病原体无交叉反应。
精密度：批内/批间CV≤3%。
局限性
检测结果受样本质量、提取方法及操作规范影响。
基因变异可能导致假阴性。
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