吉氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 吉氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Babesia gibsoni Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5258 |
检测原理
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，通过靶向吉氏巴贝斯虫（Babesia gibsoni）高度保守基因序列设计特异性引物及探针。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶标DNA的定性与定量分析。
产品特点
高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应，适用于低载量样本。
高特异性：引物探针经优化，避免与其他病原体交叉反应。
即开即用：预混反应体系，简化操作流程。
质量控制：提供无传染性阳性对照（1×10^7~10^8拷贝/μL）及阴性对照，确保结果可靠性。
适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
组分清单
| 组分名称 | 规格 | 主要成分 |
| qPCR预混液 | 500μL | 含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、热启动酶 |
| 引物-探针混合液 | 100~150μL | 特异性引物及探针 |
| 阳性对照 | 50μL | 吉氏巴贝斯虫DNA片段（1×10^7~10^8拷贝/μL） |
| 模板稀释液 | 1mL | 无核酸酶水 |
| 说明书 | 1份 | 操作流程及数据分析方法 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（定量分析需选）
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1~10^6拷贝/μL），分装至标记离心管，冰上暂存。
2. 样本DNA提取
使用兼容的核酸提取试剂盒制备待测样本DNA，同时设置阴性（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。
3. PCR反应体系配制
按以下比例配制20μL反应体系：
预混液：10μL
引物-探针混合液：2~3μL
模板DNA：5~7μL
超纯水：补足至20μL
4. 上机程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5~10 min | 1 |
| 扩增 | 95℃ 15 sec → 60℃ 1 min | 40 |
| 信号采集 | 60℃ | 1 min（FAM通道） |
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本拷贝数。
定性分析：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤35；样本Ct≤35判为阳性。
注意事项
实验分区操作，避免气溶胶污染。
稀释阳性对照需在独立区域进行。
试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。
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