检测原理
采用探针法荧光定量PCR技术，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性水解探针，释放5'端荧光报告基团（如FAM），实现实时荧光信号检测。探针3'端含淬灭基团，扩增时荧光信号与产物量成正比，通过标准曲线定量分析目标RNA/DNA。
产品名称 | 胆南星探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Arisaema cum Bile Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5149 |
产品特点
高特异性：引物及探针针对胆南星保守序列设计，避免交叉反应。
高灵敏度：检测限可达100拷贝/反应，适用于低丰度样本。
即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供模板RNA/DNA。
内控设计：含阳性对照（无传染性DNA片段）和阴性对照，排除假阴性/假阳性。
适用范围：科研用途（不适用于临床诊断）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 酶混合液（含逆转录酶） | 100μL |
| 胆南星引物混合液 | 100μL |
| 胆南星荧光探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 模板稀释液 | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（10²~10⁷拷贝/μL梯度）
取6管，分别加入45μL稀释液，依次梯度稀释阳性对照（10倍稀释，冰上操作）。
2. 样本处理
RNA提取：推荐柱式法纯化，设置阴性（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。
反转录：50℃ 30分钟（若检测RNA）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| 缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板RNA/DNA | 5 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 40循环 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |
数据分析
定量分析：以阳性对照Ct值绘制标准曲线，计算样本拷贝数。
定性判断：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤32。
注意事项
分区操作：模板制备、试剂配制、扩增需独立区域，避免污染。
耗材要求：使用无核酸酶枪头/离心管，试剂分装避免反复冻融。
质控标准：若阳/阴性对照异常，实验无效需重复。
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