检测原理
本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，通过以下步骤实现高特异性检测：
探针设计：针对大蓟基因保守区域设计特异性引物及探针，探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。
实时定量：通过监测荧光强度增长（FAM通道），结合标准曲线对目标核酸进行定性或定量分析。
产品名称 | 大蓟探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Cirsii Japonici Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5153 |
产品组成
| 组分 | 规格 | 功能 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |
| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶及Taq DNA聚合酶 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 用于标准曲线样品稀释 |
| 引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增大蓟靶序列 |
| TaqMan探针 | 50 μL | 荧光信号标记与靶序列结合 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 标准曲线制备与实验质控 |
| 说明书 | 1份 | 操作流程与数据分析指南 |
实验步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），冰上保存备用。
2. 样本RNA提取
使用兼容的RNA提取试剂盒制备样本RNA，建议设置阴/阳性对照（如超纯水与阳性稀释液）。
3. PCR反应体系（20 μL）
| 成分 | 样本管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| 样本RNA/标准品/超纯水 | 5 μL | 5 μL（水） | 5 μL（标准品） |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 信号采集 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 否 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 否 |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec | 否 |
| | 60℃ | 1 min | 是（FAM通道）|
结果判读
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
可疑：Ct值35~40需复测，复测后Ct<40判为阳性。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每批实验需包含阴/阳性对照，确保结果可靠性。
适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
重复冻融：试剂避免反复冻融（建议≤7次），分装保存。
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