检测原理
基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，通过探针法特异性检测大青叶核酸：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）实现靶序列的定性与定量检测。
产品名称 | 大青叶探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Folium Isatidis Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5152 |
产品特点
高灵敏度：优化引物与探针，检测限低至10<sup>1</sup>拷贝/μL。
高特异性：针对大青叶保守序列设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品RNA模板。
双模式检测：支持定性与定量分析（线性范围：10<sup>1</sup>–10<sup>7</sup>拷贝/μL）。
内置对照：含无传染性阳性对照（1×10<sup>8</sup>拷贝/μL）及阴性对照。
试剂盒组分
| 成分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 大青叶引物混合液 | 100μL |
| 大青叶探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10<sup>8</sup>拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
标准曲线制备
标记6管，依次稀释阳性对照（10倍梯度，10<sup>7</sup>–10<sup>2</sup>拷贝/μL）。
每管加入45μL稀释液及5μL上一浓度对照，涡旋混匀。
RNA提取
建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照）。
使用兼容RNA提取试剂（如柱式法或免提取释放剂）。
qRT-PCR反应
体系配置（20μL/反应）：
缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物2μL + 模板RNA 5μL。
程序设置：
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 40循环 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 35或 ≤ 36，且有扩增曲线。
阴性：Ct ≥ 40。
灰区（35–40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需独立区域，避免污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
防护措施：使用一次性耗材，实验后消毒台面（75%乙醇或10%次氯酸）。
运输要求：低温运输（泡沫箱加冰），避免反复冻融。
声明
本产品仅限科研使用，不得用于临床诊断或其他非科研用途。
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