乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测乙型肝炎病毒（HBV）前基因组RNA（pgRNA），具有高灵敏性、高特异性及宽线性范围（5个数量级），适用于科研领域的定性与定量分析。

组成成分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | qRT-PCR酶混合液 | 50 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | 引物-探针干粉 | 50次反应 |

| 试剂五 | 阳性对照（10^7拷贝/μL）| 50 μL |

操作流程

1. 标准曲线制备

稀释阳性对照：按10倍梯度稀释（10^1~10^6拷贝/μL），使用独立区域操作以避免污染。

步骤：

标记6管（6~1号），每管加45 μL稀释液。

6号管加5 μL阳性对照（10^7拷贝/μL），震荡后得10^6拷贝/μL标准品，依次稀释至1号管。

2. 样本RNA提取

建议设置阴性对照（NC，水）和阳性对照（PC，阳性稀释液）。

兼容市售RNA提取试剂，需避免交叉污染。

3. qRT-PCR反应（20 μL体系）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照管 | 标准曲线管 |

| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样本RNA/标准品/水 | 5 μL | 5 μL（水） | 5 μL标准品 |

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct ≥ 40

阳性：Ct ≤ 39（若39<Ct<40需复测）

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行。

污染控制：使用带芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

局限性：

结果受样本质量、提取效率及病原体变异影响。

避免阳性对照泄漏导致假阳性。

声明

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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