技术原理
采用 TaqMan探针法实时荧光PCR技术，针对穿山甲基因保守区域设计特异性引物及探针。通过荧光信号实时监测扩增过程，实现高灵敏度（检测限低至10拷贝/μL）和高特异性（与相近物种无交叉反应）。
适用场景：穿山甲核酸的定性或定量检测，用于科研用途，不适用于临床诊断。
产品名称 | 穿山甲探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Squama Manitis Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5161 |
试剂盒组成
核心组分：
预混PCR反应液（含酶、dNTPs、缓冲液）
穿山甲特异性引物-探针干粉
阳性对照（人工合成DNA片段，10^7拷贝/μL）
阴性对照（无核酸酶水）
荧光PCR专用模板稀释液
自备耗材：
无DNA/RNA污染的离心管、滤芯吸头、荧光定量PCR仪（兼容ABI、Bio-Rad等主流机型）。
操作流程
1. 样本处理
样本类型：组织、血液、分泌物等，需提取DNA（推荐商品化提取试剂盒）。
保存条件：短期-20℃，长期-70℃，避免反复冻融。
2. 试剂配制
解冻后涡旋混匀，按比例配制反应体系（20μL/反应）：
反应液19.5μL + 扩增液0.5μL + 模板DNA 5μL。
3. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| | 55-60℃ | 30 sec | |
4. 结果判读
阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
灰区（Ct 35-40）：建议复测。
性能参数
灵敏度：最低检测限10-100拷贝/μL。
特异性：与常见病毒及近源物种无交叉反应。
重复性：批内/批间变异系数＜5%。
注意事项
防污染：分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），使用滤芯吸头。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
样本降解或提取效率低影响结果准确性。
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