重楼探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品用途

专用于重楼（Rhizoma paridis）的核酸定性及定量检测，仅限科研使用，不可用于临床诊断。

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法原理：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

实时检测：扩增过程中荧光信号强度与产物量成正比，通过标准曲线对起始模板进行定量分析。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对重楼高度保守区域设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，仅需提供RNA模板。

内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），便于区分假阴性结果。

稳定性强：-20℃保存条件下性能稳定。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |

| 酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶及Taq DNA聚合酶 |

| 模板稀释液 | 1 mL | 用于标准曲线稀释 |

| 引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增重楼靶序列 |

| 荧光探针 | 50 μL | 标记FAM通道信号 |

| 阳性对照 | 50 μL (1×10⁸拷贝/μL) | 质控标准品 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

按10倍梯度稀释阳性对照（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. RNA提取

自备样品RNA，建议设置阴性/阳性提取对照。

3. qPCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 模板RNA/稀释标准品 | 5 μL | - | 5 μL |

| 超纯水 | - | 5 μL | - |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以Ct值为纵轴、标准品log拷贝数为横轴绘制曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且扩增曲线正常。

样本Ct≤35判为阳性；35<Ct<40需复测。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需充分混匀，短暂离心后使用。

阳性对照需单独存放，防止污染其他组分。

声明：本产品仅限科研用途，严禁用于临床诊断或其他非科研场景。

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