检测原理
基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，针对车前子基因保守区设计特异性引物及探针。通过荧光信号累积实时监测扩增进程，结合标准曲线实现定性/定量分析，特异性强，灵敏度达10³拷贝/μL。
产品名称 | 车前子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Plantaginis Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5171 |
试剂盒组分
| 成分 | 规格 | 功能 |
| qPCR缓冲液 | 500μL/管 | 提供反应体系基础环境 |
| 酶混合液 | 50μL/管 | 含热启动Taq酶、逆转录酶|
| 引物-探针干粉 | 50T | 特异性扩增目标序列 |
| 阳性对照（人工DNA片段）| 50μL（10⁷拷贝/μL）| 标准曲线制备及质控 |
| 阴性对照（超纯水） | 50μL | 污染监测 |
实验步骤
样本处理：
使用商品化DNA提取试剂盒（推荐Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒），避免交叉污染。
样本保存：短期-20℃，长期-70℃（避免反复冻融）。
标准曲线制备（定量检测需6个稀释梯度）：
阳性对照10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每管加入5μL至反应体系。
反应体系配制（20μL/管）：
| 组分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物-探针混合液 | 2μL |
| 模板DNA | 5μL |
PCR扩增程序：
逆转录：50℃ 30 min（RNA样本需此步骤）。
预变性：94℃ 10 min。
扩增循环（40次）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）。
结果判读
定量分析：以Ct值为纵轴，标准曲线log值为横轴，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
灰区（35<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
防污染：分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区），使用滤芯吸头及紫外消毒。
质控要求：
阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤35。
若阳性质控异常，需排查试剂或仪器问题。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；交叉污染或模板降解影响结果准确性。
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关键字： 车前子;探针法;PCR鉴定试剂盒;
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