产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术,专用于车前草(Plantago spp.)的快速、高特异性核酸鉴定,适用于科研场景下的定性或定量分析。试剂盒包含优化的引物探针组合、阳性对照及预混反应体系,灵敏度高(检测下限达10^1拷贝/μL),线性范围覆盖5个数量级,可有效区分假阴性结果。
产品名称 | 车前草探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Plantaginis Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5172 |

包装规格

试剂一:探针法qPCR缓冲液(500 μL)
试剂二:探针法qPCR酶混合液(50 μL)
试剂三:荧光PCR专用模板稀释液(1 mL)
试剂四:PCR引物-探针干粉(50次反应)
试剂五:PCR阳性对照(10^7拷贝/μL,50 μL)
操作流程

1. 标准曲线制备
使用阳性对照(10^7拷贝/μL)进行10倍梯度稀释(10^1–10^6拷贝/μL),独立操作以避免污染。
标记离心管(1–6号),依次加入稀释液并混匀,冰上保存备用。
2. 样品DNA提取
建议设置阴性对照(NC)和阳性对照(PC),PC为阳性对照的1000倍稀释液。
兼容多数商业DNA提取试剂盒,需确保模板纯度。
3. qPCR反应体系(20 μL)
样品管:10 μL缓冲液 + 2 μL酶混合液 + 1 μL探针 + 2 μL引物 + 5 μL模板。
阴性对照:以超纯水替代模板。
标准曲线管:加入对应梯度稀释液5 μL。
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 40循环扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min(采集FAM信号) |
5. 数据分析
定量检测:以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴,计算样品浓度。
定性检测:Ct≤39为阳性,≥40为阴性;39–40需复测。
注意事项

分区操作:样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行,避免交叉污染。
质量控制:阴性对照Ct≥40,阳性对照需有典型扩增曲线(Ct≤39)。
防污染措施:使用带滤芯枪头,实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。
保存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融,有效期12个月。
局限性声明
检测结果受样本采集、保存及提取方法影响。
基因突变或试剂运输不当可能导致假阴性/假阳性。
仅限科研使用,不可用于临床诊断。
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