产品概述
本柴胡探针法PCR鉴定试剂盒采用实时荧光定量PCR技术，通过特异性探针检测柴胡样本中的目标序列。产品包含优化的PCR反应体系、特异性引物和探针，适用于科研用途的柴胡鉴定。
产品名称 | 柴胡探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Bupleuri Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5174 |
产品组成
qPCR缓冲液（含dNTPs、MgCl₂等）500μL
热启动Taq DNA聚合酶混合液100μL
荧光PCR专用模板稀释液1mL
柴胡特异性引物混合液100μL
柴胡特异性探针50μL（FAM标记）
阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）50μL
核酸释放剂试用装1mL（20次用量）
产品特点
高特异性：引物和探针针对柴胡保守序列设计，经生物信息学验证，确保种属特异性
高灵敏度：最低检测限可达10³拷贝/μL
稳定性好：预混反应体系减少操作误差
操作简便：即开即用，只需添加模板
快速检测：全程约2小时完成
多重质控：提供阳性对照，便于结果判读
实验原理
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：
在PCR反应体系中加入特异性荧光探针
探针5'端标记报告基团（FAM），3'端标记淬灭基团
PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性水解探针
报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号
通过监测荧光信号实现实时定量
操作步骤
标准曲线制备（10倍梯度稀释）
取6支离心管，编号2-7
每管加入45μL模板稀释液
从阳性对照开始进行10倍系列稀释（10⁷-10²拷贝/μL）
反应体系配制（20μL体系）
| 组分 | 体积(μL) |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板 | 5 |
PCR反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 30min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 15sec | 40 |
| 退火延伸 | 60℃ | 1min | 40 |
注：在退火延伸步骤采集FAM通道荧光信号
结果分析
定量分析：以标准品Ct值为纵轴，拷贝数对数为横轴制作标准曲线，计算样品浓度
定性分析：Ct值≤35判为阳性；35<Ct值<40需重复检测；无扩增曲线为阴性
注意事项
实验前请确认样本类型和保存条件（建议使用液氮或RNA保护剂保存）
操作分区进行，避免交叉污染
阳性对照最后添加，防止污染其他反应
反应体系配制需在冰上进行
本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断
不同仪器需优化反应条件
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