检测原理
采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶基因特异性结合。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。
定量分析：通过荧光强度变化实时监测扩增进程，结合标准曲线对目标基因进行定量或定性检测。
产品名称 | 板蓝根探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Isatidis Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5192 |
产品组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |
| 板蓝根特异性引物混合液 | 100μL | 靶向板蓝根保守基因区域 |
| 荧光探针 | 50μL | 特异性结合扩增产物 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 验证实验有效性 |
| 模板稀释液 | 1mL | 标准曲线制备用 |
实验步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每个梯度设3复孔。
2. 样本处理
RNA提取：推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，避免DNA污染。
阴性/阳性对照设置：以超纯水为阴性对照，稀释阳性对照为弱阳性对照（10³拷贝/μL）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| 探针 | 1μL |
| 模板RNA | 5μL |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |
| | 60℃ | 1 min（采集荧光） | |
数据分析
定量检测：以Ct值为纵轴，标准品log拷贝数为横轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型。
可疑：35<Ct<40，需复测。
阴性：Ct≥40或无扩增曲线。
注意事项
样本要求：RNA需避免反复冻融，提取后建议立即检测或保存于-80℃。
防污染措施：分设试剂配制区、样本处理区及扩增区，使用带滤芯枪头。
应用限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
质量控制：每次实验需包含阴性对照和阳性对照，确保结果可靠性。
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