麻黄根探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 麻黄根探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Ephedrae Radix Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5041 |
产品原理
采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过检测荧光强度实现定量/定性分析。
高特异性：针对麻黄根保守基因区域设计引物及探针，避免交叉反应。
产品组成
| 成分 | 规格 | 规格 |
| PCR缓冲液 | 500μL | 975μL反应液 |
| 酶混合液 | 100μL | 25μL扩增液 |
| 引物混合液 | 100μL | 含于反应液 |
| 荧光探针 | 50μL | 含于反应液 |
| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL阳性质控品 |
| 阴性对照 | 无（需自备超纯水） | 50μL阴性质控品 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（以10²~10⁷拷贝/μL为例）
梯度稀释阳性对照（6个浓度），避免交叉污染。
每稀释步骤需更换枪头，冰上保存。
2. 样本处理
RNA提取：推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，提取后-15℃以下保存。
质控设置：每批次需设阴性对照（水）和阳性对照（试剂盒提供）。
3. PCR扩增（20μL体系）
反应体系：
探针法缓冲液 10μL
酶混合液 2μL
引物/探针各 1-2μL
模板RNA 5μL
扩增程序：
逆转录：50℃ 30 min
预变性：94℃ 10 min
40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）
4. 结果分析
定量检测：以Ct值绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤35，扩增曲线呈指数增长。
阴性：Ct ≥40或无扩增。
灰区（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
防污染：实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用滤芯枪头。
质控要求：
阴性对照无扩增（Ct≥40）。
阳性对照Ct≤30且曲线典型。
适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
重复冻融：避免超过7次，以免降低试剂活性。
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