芹菜源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

芹菜源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于检测样品中芹菜源性成分的核酸，具有高灵敏度和特异性。适用于科研领域，严禁用于临床诊断。

产品组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50 T |

| 试剂五 | PCR阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL |

操作步骤

1. 标准曲线样品制备

标记6支离心管（6至1号），每管加入45 μL模板稀释液。

依次梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL），从6号管（10^6拷贝/μL）至1号管（10^1拷贝/μL），每稀释一步更换枪头，震荡混匀后冰上保存。

2. 样品DNA制备

建议设置N+2个提取（含阳性对照PC和阴性对照NC）。

使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样本，PC为阳性对照1000倍稀释液，NC为超纯水。

3. qPCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 样品管（N+2） | 阴性对照管 | 标准曲线管（2-7号） |

| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样品DNA | 5 μL | — | — |

| 标准曲线稀释液 | — | — | 5 μL |

| 超纯水 | — | 5 μL | — |

4. PCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 40循环扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且呈典型扩增曲线。

样本Ct≤39为阳性，≥40为阴性；临界值（39-40）需复测。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、加样），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸钠或75%乙醇消毒台面及移液器。

试剂避光保存，反应液避免气泡，管盖需密封。

所有组分均视为污染物，按生物安全规范处置。

保存与运输

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输：低温干冰或冰袋运输。

声明：本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断或其他非科研用途。

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