白头翁探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于白头翁（Radix pulsatillae）的核酸定性及定量检测。通过特异性引物和探针设计，结合Taq酶的5’核酸外切酶活性，实现对目标序列的高灵敏、高特异性扩增与检测。适用于科研用途，不可用于临床诊断。

产品组成

| 成分编号 | 成分名称 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50-100 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针干粉/混合液 | 50-100 μL |

| 试剂五 | PCR阳性对照（1×10^7-10^8拷贝/μL） | 50 μL |

实验流程

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（6-7管），依次加入45 μL稀释液，从阳性对照起始逐级稀释至10^1-10^6拷贝/μL。

操作需在独立区域进行，避免交叉污染。

2. 样本DNA/RNA提取

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

兼容多数商业提取试剂盒，需保证模板纯度。

3. qPCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| 缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物 | 2 | 2 | 2 |

| 模板 | 5 | - | - |

| 标准品 | - | - | 5 |

| 超纯水 | - | 5 | - |

4. 扩增程序

逆转录（若需）：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：Ct≤39为阳性，Ct≥40为阴性；39-40间需复测。

注意事项

防污染：分区分步操作，使用带芯枪头及专用工作服。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

局限性：

基因突变或提取效率差异可能导致假阴性；

交叉污染或试剂失效可致假阳性。

安全处理：实验后需用次氯酸或酒精消毒台面，废弃物按生物安全规范处置。

技术参数

灵敏度：可检测低至10^1拷贝/μL。

线性范围：至少覆盖5个数量级（10^1-10^6拷贝/μL）。

特异性：引物探针针对白头翁保守区设计，无交叉反应。

声明：本产品仅限科研使用，操作需严格遵守实验室安全准则。

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